菌落总数测试片
1 原理及适用范围
菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL（g）检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是zui常用的微生物检测项目。
菌落总数测试片（FilmplateTM Aerobic count plate BB202）是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在测试片上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。
本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定，也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。
执行标准：食品卫生微生物学检验菌落总数测定??PetrifilmTM测试片法（GB/T 4789.2-2008）。
2 操作方法
2.1 样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。
2.2 接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将（BB202）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
2.3 培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48h。
3 结果判读
细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30～300个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（克）样品中所含的细菌菌落总数。
4 计数原则及报告方式
4.1 若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升（或克）样品中菌落总数结果。
4.2 若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算:
式中：
N??样品中菌落数；
∑C??测试片上（含适宜范围菌落数的测试片）菌落数之和；
n1??*个适宜稀释度测试片数；
n2??第二个适宜稀释度测试片数；
d??稀释因子（*稀释度）。
示例：
4.3 若所有的稀释度菌落总数均大于300，则对稀释度zui高的测试片进行计数，其他测试片可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以zui高稀释倍数计算。
4.4 若所有的稀释度菌落总数均小于30，则应按稀释度zui低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4.5 若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以zui低稀释倍数计算。
4.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分小于30或大于300，则以zui接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4.7 菌落总数的报告
4.7.1 菌落总数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。
4.7.2 大于或等于100时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
4.7.3 若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。
4.7.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
4.7.5 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
5 表面取样方法
加1mL灭菌磷酸缓冲液（或生理盐水）在测试片上，至少静置5min，使培养基凝固；提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。
6 附加说明
6.1 检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达80％以上，山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明，24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的87％。
6.2 磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L*溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15分钟，或者放入消毒碗柜中消毒。
6.3 生理盐水的配制与灭菌：取8.5g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中，先煮开后进行分装，取9mL加入到10mL洁净试管中，盖上硅橡胶塞或棉纱塞，放入红外线消毒柜中消毒。
7 保存条件
本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，在拆封前将整包回温至室温。
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